彼岸145
本文以家蚕作为鳞翅目昆虫模式生物，使用不同染色方法对家蚕血细胞染色，通过显微镜观察血细胞的形态，并对其进行类型鉴定，为昆虫血细胞分类、免疫功能的进一步研究提供实验依据。实验中，分别使用瑞氏染液、姬姆萨染液、瑞氏-姬姆萨复合染液对家蚕血细胞进行染色，通过对这三种血涂片以及未染色血涂片镜检，发现使用瑞氏染色法和吉姆萨染色法染色效果较差，血细胞形态不易观察；而在未染色和使用瑞氏-姬姆萨染液染色的血涂片中，细胞结构清晰可辩，可作为家蚕血细胞形态观察及类型鉴定的方法。观察中，找到了五种不同形态的血细胞，与目前普遍认同的分类方法一致，主要分为原白血细胞、浆细胞、颗粒细胞、小球细胞和拟绛色细胞。 
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21世纪，人类面临着更为严峻的人口剧增、资源匾乏及环境污染的压力和挑战，开辟新资源、走可持续发展道路是我国农业产业化发展的必由之路。昆虫作为地球上最大的未被充分利用的资源宝库而倍受关注。昆虫蛋白质资源的开发及其产业化，必将进入以高科技、高收益为特点的多层次、综合利用阶段。昆虫富含蛋白质、不饱和脂肪酸、微量元素，是人类的高级营养源。 黄粉虫的蛋白质中含有18种氨基酸，且包含人体所必需的8种氨基酸，含量占氨基酸总量的40%，其配比接近于人体氨基酸需要量的模式，还含有多种矿物质、维生素和微量元素，被称为“动物营养宝库”。国外有研究表明黄粉虫蛋白具有提高人体免疫力、抗疲劳、延缓衰老、降低血脂和促进胆固醇代谢功能。本文主要对超临界CO2萃取技术提取黄粉虫油制备黄粉虫脱脂粉的最佳工艺条件进行了研究，以得到的黄粉虫蛋白粉为原料，使用碱提法和酶提法对黄粉虫进行蛋白的提取研究，并对这两种提取工艺进行比较研究。 首先对黄粉虫进行脱脂制备粗蛋白粉，采用超临界CO2萃取技术对黄粉虫进行脱脂处理，以黄粉虫油提取率为指标，采用三因素三水平正交试验设计确定超临界CO2萃取黄粉虫油的最佳工艺条件为：萃取温度45℃，压力25MPa，时间180min。黄粉虫油提取率为99%。 碱法提取具有提取率高，成本低的特点，采用单因素试验和正交试验结果表明，碱提法的最佳条件为：碱液浓度为0%mol/L，在70℃，液固比为12:1的条件提取黄粉虫蛋白90min，在该提取工艺条件下，黄粉虫蛋白提取率可达到11%，纯度为20%。 酶法提取具有反应条件温和和底物特异性好等特点。不同的蛋白酶提取黄粉虫蛋白有不同的作用方式，以蛋白提取率和蛋白提取液的品质为指标，比较各种蛋白酶提取黄粉虫蛋白的效果，认为复合蛋白酶和复合风味蛋白酶提取效率高和最终蛋白提取液的品质佳。为提高原料利用率和黄粉虫蛋白提取率，选择这两种酶为提取用酶。采用两种酶单独提取、分步作提取及复合作提取的结果进行比较，以蛋白提取率为指标，水解度为参考指标，采用正交实验和单因素实验，确定黄粉虫蛋白酶法提取的最佳工艺为复合蛋白酶和复合风味蛋白酶双酶复合进行酶法提取：加酶量6%复合蛋白酶与复合风味蛋白酶加量比1:3、液固比9:1、提取时间8小时，pH 5，温度为55℃。在该最佳工艺条件下提取黄粉虫蛋白，提取率可以达到 83%，纯度为17%。 黄粉虫体内含有各种色素和多酚类物质，其中多酚类物质在反应中易产生美拉德反应，在酶提过程中或多或少会产生苦味肽，而且为了保持其在最适pH值范围内，需加入酸、碱，产生了大量的盐，而且得到的黄粉虫蛋白提取液颜色较深，黄粉虫蛋白需精制处理。通过添加3%活性碳进行脱色、脱苦，可获得色清、味好的蛋白提取液。通过阴阳离子交换树脂可除去20%的盐分，最后通过喷雾干燥得到浅黄色的蛋白质粉末。 碱提法获得的蛋白产品的安全毒理学评价结果表明:碱提法所得蛋白产品是基本安全无毒的(其小鼠LD50大于120g/Kg)，因此，可以作为人和其他动物的高蛋白资源。 总之，本论文通过两种蛋白质提取方法的比较研究，初步确立了黄粉虫中蛋白质的最佳提取方法和工艺，为以后开发黄粉虫蛋白质资源提供了理论基础。 关键词：黄粉虫；蛋白质；超临界萃取；碱法；酶法；提取工艺；氨基酸
