小夫子1347
结论不是具体实验结果的再次罗列，也不是对今后研究的展望，而是针对这一实验所能验证的概念、原则或理论的简明总结，是从实验结果中归纳出的一般性、概括性的判断，要简练、准确、严谨、客观。不能用已知的理论或生活经验硬套在实验结果上；更不能由于所得到的实验结果与预期的结果或理论不符而随意取舍甚至修改实验结果，这时应该分析其异常的可能原因。如果本次实验失败了，应找出失败的原因及以后实验应注意的事项。扩展资料：实验报告的书写是一项重要的基本技能训练。它不仅是对每次实验的总结，更重要的是它可以初步地培养和训练学生的逻辑归纳能力、综合分析能力和文字表达能力，是科学论文写作的基础。因此，参加实验的每位学生，均应及时认真地书写实验报告。要求内容实事求是，分析全面具体，文字简练通顺，誊写清楚整洁。 
华南农业大学实验报告 实验项目名称: 《兽医微生物》综合实习 所属课程名称: 《兽医微生物学》 学生姓名:杨滨 学号:200730330126 专业年级:07 动医(1)班 成绩: 一，实验目的 掌握营养肉汤，血琼脂平板，麦康凯平板，普通琼脂，三糖铁层琼脂的配置方法 细菌的分离培养技术(解剖，病料的采集，从组织中分离细菌，培养细菌，移植细菌， 纯化细菌，细菌接种) 细菌的鉴定技术(光学显微镜油镜的技术，组织涂片，在组织材料中认识细菌，辨别细 菌，生化实验，血清学实验技术及细菌片的涂片，染色，镜检等技术) 病毒的鸡胚分离培养技术(鸡胚死活的鉴定，鸡胚的接种，胚液的收集)病毒的血凝试 验和血凝抑制试验 认识真菌(酵母菌，青霉菌，曲霉菌，毛霉菌，根霉菌)的形态 二，实验要求 通过本次综合实习全面系统地掌握兽医微生物学的基本技术和细菌检验的基本程序，掌 握各种生理生化试验的原理及试验方法，将理论与实践有机统一 加强对临床常见病原菌鉴定本领的操作训练 熟练掌握微生物实验常用仪器的使用及培养基制备的原则和方法 对每一步实验要认真对待，对实验结果应详细记录，仔细分析，以便得出正确的鉴定结 论，实习结束后，全面总结并写出实习报告 三，实验内容 细菌的分离及诊断 病毒的分离及诊断 真菌的观察 四，实验材料与设备 实验材料 (1) 无菌注射器，抗凝剂，健康鸡，健康兔，血琼脂基础，锥形瓶，蒸馏水，麦康凯 琼脂粉，三糖铁琼脂粉，营养琼脂粉，营养肉汤基础，雏鸡，小白鼠，木板，图钉，剪刀， 接种环，接种针，镊子，各种染色液，移液枪，葡萄糖培养管，蔗糖培养管，乳糖培养管， 甘醇培养管，靛基质培养管，硫化氢培养管，H2O2，氧化酶试纸，巴氏杆菌标准毒，巴氏 杆菌阳性血清，靛基质指示剂，载玻片，显微镜等 (2) 装有不明病毒的 80 编号小管一支，9-10 日龄鸡胚，打孔器，一次性注射器，剪 刀，记号笔，镊子，灭菌乳钵，离心管，空平皿，玻璃沙，空试管几支，西林瓶，青霉素， 移液管，锥型瓶，U 型 96 孔微量反应板，蛋架 (3)载玻片，接种环，酵母菌玻片，青霉菌玻片，曲霉菌玻片，毛霉菌玻片，根霉菌玻 片，镊子，盖玻片，显微镜 实验设备高压消毒炉，恒温培养箱，离心机，电子天平，冰箱，轻微振荡器 五，实验方法和步骤 实验方法和步骤 (一)细菌的的分离及诊断 实验前准备(此步分量为一组 6 个人) (1)心脏采血:触摸健康兔左前肢以下，胸骨以上，靠左的位置，通过心跳感觉心脏 位置， 用碘酒，酒精棉球消毒，用无菌注射器抽取 1ml 抗凝剂，并润湿注射器， 待酒精干后， 将针插入，边插边回抽，当有血冲上针筒时，即抽取血 9ml，用作血平板 (2)血琼脂平板:称取琼脂基础 3g，加 100ml 蒸馏水，加热溶解，倒入锥形瓶，高 压灭菌 15min，待冷却至 50℃，加入无菌脱纤维鸡兔血 10ml，摇匀，倾注至灭菌平皿 (3)麦康凯平板:称取麦康凯琼脂粉 3g，加 600ml 蒸馏水，加热溶解，倒入锥形瓶， 高压灭菌 15min，倾注至灭菌平皿 (实验室准备) (4)三糖铁琼脂:称取三糖铁琼脂粉 15g，加 240ml 蒸馏水，加热溶解，分装到试管， 每支约 10ml，高压灭菌 15min，趁热摆斜面，待其凝固 (实验室准备) (5)营养肉汤:称取营养肉汤基础 4g，加 200ml 蒸馏水，加热溶解，分装到试管，每 支约 10ml，高压灭菌 (实验室准备) 分离培养取一因细菌感染而致死的小鼠，腹部向上固定于木板上，用酒精棉球消毒体表，打开腹 腔，暴露肝脏，用剪刀夹一燃烧酒精棉球，在肝脏表面烫之杀死表面杂菌，用灭菌接种环插 入烧灼部，将接种环旋转 1 圈，然后取材划线接种于血琼脂平板上，置 37℃温箱培养 形态与染色小鼠作分离培养后，用灭菌镊子和剪刀取一小块肝脏，作组织涂片，进行瑞氏染色，镜 检观察细菌形态特征 肉汤增菌培养观察血琼脂平板上的细菌菌落形态特征， 然后用灭菌接种环挑取可疑菌落， 涂抹到载玻 片上， 进行革兰氏染色， 镜检 用灭菌接种针环挑取可疑菌落， 接种到加有血清的营养肉汤， 摇匀，置 37℃温箱培养 生化实验 观察肉汤变化情况，用灭菌接种环取肉汤中已纯化细菌，涂抹到载玻片上，进行革兰氏 染色，镜检进行生化试验 (1)用灭菌接种环取肉汤中已纯化细菌，分别在麦康凯平板，营养琼脂上划线 (2)用灭菌接种针取肉汤中已纯化细菌，分别在葡萄糖培养管，蔗糖培养管，乳糖培养 管，甘醇培养管，靛基质培养管，硫化氢培养管进行穿刺 (3)用灭菌接种针取肉汤中已纯化细菌，在三糖铁琼脂上进行划线并穿刺 将所有生化培养管及培养皿，置 37℃温箱培养 氧化酶和触酶试验用氧化酶试纸按压于菌落之上，若试纸变色则为阳性 取过氧化氢滴加菌落，若产生气泡，则为阳性 观察生化实验结果 往靛基质培养管滴加指示剂，观察变化，其它生化管直接进行观察 (二)病毒的实验诊断 实验前准备 (1)心脏采血:触摸健康鸡左翼以下，胸骨以上，嗉囊靠左的位置，通过心跳感觉心脏 位置，用碘酒，酒精棉球消毒，用无菌注射器插入，边插边回抽，当有血冲上针筒时，即抽 取鸡血 2~3ml，装入密封管中，用于血清得制备;用无菌注射器抽取 1ml 抗凝剂，并润湿注 射器，用同样方法取鸡血 9ml，并装入离心管中，用于鸡红细胞的制取 (2)血细胞悬浮液:往无菌离心管注入 2~3ml 鸡血，再加入 4ml 生理盐水，摇匀，放入 离心机以 2000r/s 离心 10min，然后取出离心管并用无菌注射器吸去其上清液，重复 4 次 用移液枪吸取 1ml 血细胞到 100ml 无菌玻璃瓶中，再加入 99ml 生理盐水，冷藏 病毒病料的采集通过无菌手术，取病鸡的脾脏，肝脏，肺，脑的组织块，将其剪碎后，加入少量玻璃砂 研磨，然后加入 4ml 生理盐水和双抗各 01ml，用注射器将其注入离心管，以 10000r/s 进 行离心 接种接种鸡胚，采用绒毛尿囊腔接种，通过照胚检测鸡胚死活，在气室边缘避开胚体和血管 处作一记号，作为接种的部位，碘酒，酒精消毒，并用打孔器在此处打孔;用 1ml 注射器吸 取病毒液 1ml，注射器沿小孔插入鸡胚约 5CM，注入病毒液以胶布封孔，置于 37 C 温箱中直立培养 观察已接种鸡胚 24 小时后观察鸡胚未死亡 处理已接种鸡胚接种 48 小时后观察鸡胚已死，将鸡胚置 4 C 冷冻过夜 收胚收获病毒液采用无菌手术去气室顶壳，开口直径为整个气室大小，用无菌镊子撕去 部分蛋膜， 撕破绒毛尿囊膜而不撕破羊膜， 用镊子轻轻按住胚胎， 用消毒注射器吸取尿囊液， 置于西林瓶中，备用解剖胚胎 血凝及血凝抑制试验采用 1%红细胞，以及新城疫的血清和禽流感血清，按下表操作 ①血细胞凝集试验(HA) (单位:ūl) 孔号 稀释 度 生理 盐水 病毒 鸡红 细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃 1 1:2 50 2 1:4 50 3 1:8 50 4 1: 16 50 5 1: 32 50 6 1: 64 50 7 1 : 128 50 8 1 : 256 50 9 1 : 512 50 10 1 : 1024 50 11 1 : 2048 50 12 对照 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 用轻微震荡器震荡 1~2min， 放入 37℃箱中 15~判断 1 个单位血凝价，并配成 4 个单位病毒溶液 2 ○血细胞凝集抑制试验(HI) (单位:ūl) 孔号 稀释 度 生理 盐水 新城 疫血 清 1 1:2 50 2 1:4 50 3 1:8 50 4 1: 16 50 5 1: 32 50 6 1:64 50 7 1 : 128 50 8 1 : 256 50 9 1 : 512 50 10 1 : 1024 50 11 1 : 2048 50 12 对照 50 弃 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 4 单 位病 毒 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 用轻微震荡器震荡 1~2min，放入 37℃培养箱中 15~30min 鸡红 细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 用轻微震荡器震荡 1~2min，放入 37℃培养箱中 15~ (三)真菌的形态观察 真菌的形态观察 直接在显微镜下观察酵母菌装片，青霉菌装片，曲霉菌装片，毛霉菌装片，根霉菌装片 六，实验结果与分析 实验结果与分析细菌的的分离及诊断 (一) 细菌的的分离及诊断 瑞氏染色后，显微镜观察到蓝色，两极浓染的球杆菌 在血琼脂平板上培养 24 小时后，长出灰白色，湿润，有光泽，露珠状的小菌落 对血琼脂平板上的菌体革兰氏染色后，显微镜观察到红色，两极浓染的球杆菌 在营养肉汤中培养 24 小时后，原本清亮的液体变为浑浊，说明菌体在营养肉汤中大量繁 殖 对营养肉汤中的菌体革兰氏染色后，显微镜观察到红色，两极浓染的球杆菌，说明该菌 是革兰氏阴性菌 生化试验结果: 培养 基类 型 现象 三 糖 铁 麦康 凯 葡 萄 糖 + 蔗 糖 + 乳 糖 — 甘 醇 + 靛 基 质 + 硫 化 氢 — + - 三糖铁琼脂:培养基底部变黄，说明产酸，但不产气，不产硫化氢，可能被污染 麦康凯平板:不生长 葡萄糖生化管:由原本的紫色变为黄色 蔗糖生化管:由原本的紫色变为黄色 乳糖生化管:原来的紫色变浅 甘醇生化管:由原本的紫色变为黄色 靛基质生化管:滴加指示剂后，产生玫瑰红色 硫化氢生化管:由于缺乏硫化氢指示剂，无法对硫化氢一项做出判定，该培养管并未变色 氧化酶和触酶实验:氧化酶试纸变紫色，为阳性;而触酶试验产生气泡，为阳性 以上结果与课本对照后较为接近，极有可能是巴氏杆菌 (二)病毒的实验诊断 24 小时后检查鸡胚未死亡，说明实验操作严格无菌操作，未感染其他细菌 鸡胚收获及解剖 打开蛋壳后，提取病毒同时接种老师提供的病毒 HA 试验: HA 试验结果如下表: (结果第一排为自己所收病毒液，第二排为老师所给病毒: ) 孔 号 稀 释 度 结 果 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 血细 胞对 照 # # # # # # # # # # # # # # # +++ +++ ++ ++ + + - - 结果:自己所收病毒血凝价为 1:老师所给病毒血凝价为 1: HI 试验 HI 试验结果如下表: (结果第一排为自己所收病毒液，第二排为老师所给病毒) 孔 号 稀 释 度 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 病 毒 对 照 结 果 + ++ # + # ++ # # # # # # # # 血 清 对 照 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 结果:自己所收病毒的 HI 效价为 1:老师所给病毒的 HI 效价为 1: (三)真菌的形态观察 酵母菌 青霉菌 曲霉菌 根霉菌 毛霉菌 七，实验总结 通过本次实验可了解并熟悉检验位置菌种的方法， 推断菌种时要综合分析 可能污染杂菌 的实验要重复进行 病毒的接种及吸取尿囊液时， 要注意保持无菌操作， 以防带进其他细菌， 影响实验结果 在实验过程中，我就被灌输了很强的意识:一进到实验室中，就要尽可能地做好一切保 护措施，这是保护自己的基本条件和要求 实验中所涉及的基本实验操作，我们都要清楚了解并且知道其中的原理，这对于我们来 说尤为重要 实验中必然会遇到一些自己难以理解的问题，这要求我们要与指导老师做好沟通工作， 并且要加强团队合作精神与加深自立意识，加强自我的动手能力 通过本次综合实验，我们巩固了本学期所学的普通培养基制备和鲜血培养基的制备，光 学显微镜油镜的使用，细菌片的分离培养鉴定技术，病毒的鸡胚分离培养技术(鸡胚死活的 鉴定，鸡胚的接种，胚液的收集)病毒的血凝试验和血凝抑制试验方法提高我们综合运用 兽医微生物学所学知识的能力，实际动手能力及观察，分析问题的能力
· 94 ·液调pH，使之成为5Be’，pH7～8的母液溶液。用IRC一50[NH4 ]型树脂吸附，再用2％氨水溶液洗脱，将洗脱液浓缩至15Be’。将其上D一2018型大孔吸附树脂，并用高纯水洗脱，分段收集各组分。将卡那霉素B稀溶液进行浓缩至24Be’，用乙醇结晶，即得到卡那霉素B成品。卡那霉素结晶母液一5Be’、pH7—8的母液溶液一IRC一50[NI-h ]一2％氨水洗脱一浓缩一上D一2018型大孔吸附树脂一卡那霉素B收集液一浓缩一乙醇结晶一卡那霉素B成品。3 小结3．1 新工艺中的D一2018型树脂为弱酸型阳离子大孔吸附树脂，它的再生处理彻底与否决定了对卡那霉素B的分离效果。3．2 浓缩时要求真空度在0．095 Mpa以上，温度在30℃辽宁药物与临床2003年第6卷第2期左右。只有这样才能保证卡那霉素B成品的色泽和纯度。3．3 利用高效液相色谱法检测两种工艺条件下生产的卡那霉素B的纯度：新工艺生产的卡那霉素B纯度在90％ 以上，达到出口的要求；老工艺生产的卡那霉素B纯度只有70％ 左右。3．4 在新工艺中采用乙醇结晶，比老工艺中采用甲醇、丙酮重结晶更经济、更安全，同时更简便。3．5 结晶母液中的杂质对分离柱的分离效果有很大的影响，我们通过用卡那霉素A和卡那霉素B纯品的混合液上柱分离作对比，它的分离效果明显好于结晶母液上柱分离的效果，所以在上柱分离之前应对结晶母液进行除杂质处理。参考文献：[1] 孙淑卿．从卡那霉素结晶母液中分离卡那霉索B[J]．抗生素杂志，1985，5(2)：26．27．(收稿：2002—08—07)HPLC法测定阿司匹林片的含量王震红。，卞志家(1、辽宁省药品检验所，辽宁沈阳 110023；2、中国医科大学附属第二医院，辽宁沈阳110004)中图分类号：R927．2 文献标识码：B 文章编号：1007—9858(2003)02—0094—02阿司匹林片为常用的解热、镇痛药【1】，收载于<中国药典2000年版)二部。原含量测定方法为酸、碱中和滴定法。本文提出采用高效液相色谱法【2】测定其含量，可消除其他含有酸、碱的物质对其测定的干扰，可更有效的控制制剂的质量。方法操作简便，专一性强，结果准确。1 仪器与试药1．1 仪器高效液相色谱仪：岛津LC一10A高效液相色谱仪(岛津LC一10AD泵，SPD一10A紫外检测器)；CLASS— LC10工作站。色谱柱：ODS C18色谱柱(150 mm×4．6mm，填料：Kromasil，粒度：5 m)。1．2 试药 阿司匹林对照品(大连某制药厂)，甲醇(色谱纯试剂)，冰醋酸、盐酸(分析纯试剂)。2 方法与结果2．1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：ODS C】8色谱柱(150mm×4．6ram)，填料Kro．masil(5 m)，流动相：甲醇一水一冰醋酸(40：59：1)，流速：1．0 ml／min，检测波长：280 nm，室温。进样量：20 。理论板数按阿司匹林计算不低于6 000，分离度符合要求。2．2 分离度试验(方法的专属性考察)用强光照射，高温，酸、碱水解，进行加速破坏，以研究降解产物对阿司匹林主成分测定的干扰；同时对辅料进行测定。结果表明：降解产物及辅料存在的条件下，采用反相HPLC法可准确测定出阿司匹林的含量，方法专属性良好。2．3 标准曲线的制备精密称取阿司匹林对照品适量，加0．1 mo1／L盐酸溶液配制成每1 ml中含100，ug阿司匹林的溶液，作为储备液。精密量取储备液1，3，5，7，9 ml，分别置25 ml量瓶中，作者简介：王震红(1976一)，女，山东成武人，药剂师。加0．1 mol／L盐酸稀释至刻度，摇匀，分别进样20 l，以峰面积为纵坐标(Y)，阿司匹林的绝对进样量( g)为横坐标(x)作图。其结果表明，阿司匹林在0．083～0．750“g呈良好的线性关系，其回归方程为Y=3．90×10 X+4．89×10(r=0．999 9)。2．4 回收率试验准确称取阿司匹林对照品8～12 mg．分别按处方量加入辅料，按“2．7”项操作，阿司匹林的平均回收率为99．5％ ．RSD ％ ： 0．58％ 。2．5 准确性试验精密称取同一批号的样品5份，按“2．7”项操作，计算出每份的含量分别为99．6％，99．6％ ，99．7％，98．6％ ，99．0％ ，平均含量为99．3％ ，RSD％ =0．48％ ，结果表明此方法的准确度较好。2．6 精密度试验取“准确性试验”中的样品溶液1份，按“2．7”项操作．连续进样5次，测得平均峰面积为13540 C，RSD％ =0．34％ ，结果表明阿司匹林的精密度较好。2．7 含量测定取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于阿司匹林10 mg)。置100 ml量瓶中，加0．1 mol／L盐酸溶液适量。超声使阿司匹林溶解，放冷至室温．加0．1 mo1／L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml，置25 ml量瓶中，加0．1 mol／L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀。取20 注入液相色谱仪，记录色谱图。另取阿司匹林对照品适量。加0．1 mol／L盐酸溶液溶解并稀释制成每1 ml中约含阿司匹林20 g的溶液，取20 同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。测定3批样品，结果分别为99．9％．维普资讯 辽宁药物与临床2003年第6卷第2期98。096，99．3％ o3 讨论3．1 阿司匹林在水中易水解，所以选用0．1 mol／L盐酸溶液为溶液，防止其水解成游离水杨酸。3．2 参照(中国药典)2000年版二部中阿司匹林栓含量测定t31的检测波长为280 nm，所以将检测波长定为280 nm。3．3 制剂的含量限度较宽，因而对于制剂的含量测定方· 95 ·法，应以专一性为主，可更好的确定制剂的成分，以便更好控制样品的质量。采用HPLC法符合这一要求，为制剂含量测定的最佳选择。参考文献：[1] 中国药典[s]．二部．2000．327—328．[2] 孙毓庆．现代色谱法及其在医药中的应用[M]．北京：人民卫生出版社．1998．146—152。180—188．[3] 中国药典[s]．二部．2000．330—331．(收稿：2003—01—08)薄层扫描法测定牛黄醒脑丸中盐酸小檗碱的含量杜 震 ，刘 阳 ，李 虹(1．中国医科大学附属第一医院药剂科，辽宁沈阳110001；2．辽宁省药品检验所，辽宁沈阳 110023)中图分类号：R927．2 文献标识码：B 文章编号：1007—9858(2003)02—0095—01牛黄醒脑丸主要具有祛风除湿、舒筋通络止痛之功效，由黄连、黄芩、栀子、郁金、冰片、朱砂等十二味中药组成。其中黄连为君药。黄连中含有盐酸小檗碱。为了有效地控制药品质量，我们采用薄层色谱法对牛黄醒脑丸中的黄连进行含量测定。1 仪器与试药日本岛津CS一930薄层扫描仪．硅胶G(青岛海洋化工厂)；盐酸小檗碱中国药品生物制品检定所．经薄层扫描测定，纯度为98．6％ 。2 实验方法与结果2．1 对照溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1 ml含0．04mg的溶液。2．2 供试品溶液的制备取重量差异项下的本品剪碎，取约1．2 g，精密称定，置100ml锥形瓶中，精密加入盐酸一甲醇(1：100)25ml，称定重量，6o℃ 水浴中加热15分钟，取出超声处理3O分钟室温放置过夜，再称定重量，用盐酸一甲醇(1：lOO)~b足重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。2．3 色谱条件及扫描条件吸附剂：硅胶G。展开剂：苯一醋酸乙酯一异丙醇一甲醇一水(6：3：1．5：1．5：o．3)，另槽加入等体积的浓氨试液，预平衡15分钟。荧光直线扫描汞灯为光源，激发波长 =366 rimo狭缝2 m1n×7mmo2．4 线性关系考察精密吸取浓度为0．042 6 mg／ml的盐酸小檗碱溶液1，2，3，4，5 ，分别点于同一板，盐酸小檗碱点样量在0．042 6- 0．213 0，ug范围内线性关系良好。其回归方程为A=579．531+524 71．497 6 C，r=0．998 5。直线不通过原点。采用外标两点法计算。2．5 稳定性试验取供试品溶液依法展开，每隔1小时扫描测定1次，结果表明，斑点在5小时内稳定。RSD％ =0．675％ 。2．6 精密度试验a．同板精密度：取同一供试品溶液在同一硅胶G薄层作者简介：杜震(1974一)．男，辽宁锦州人，药剂师。板上点样5次，依法点样展开、显色测定。结果RSD％ =1．30％。b．异板精密度：取同一供试品溶液在5块硅胶G薄层板上，分别依法点样、展开、显色、测定。结果RSD％= 1．59％ 。2．7 重复性试验取同一批号样品5份，按上述方法测定含量结果为6．467，6．376，6．355，6．466。6．
