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医学论文写作流程五大步骤： （1）医学论文写作准备工作： 搜索和积累资料，包括文献资料摘录，实验室的观察数据，各种记录，调查研究所得的各种结果等。所搜集的资料越多、越丰富，观察的问题就越全面，对分析、研究的问题就越有利。 (2)医学论文写作命题： ①确定研究方向：由于学科种类繁多，内容广泛，只有集中研究院某一学科领域中的某一方面的问题，才能选出合适的题目; ②创新性：是医学论文的宗旨。提出新的见解、新的观点，作出新的结论。总之要有自己的独到高见; ③要重视命题的必要性和可能性，防止盲目性; ④标题是论文的题目：通常是研究的课题，起到画龙点睛的作用; ⑤标题必须名副其实：充分体现文章的内容，使题目和内容一致，鲜明醒目，简短新颖，使人一目了然，易读易记。 (3)医学论文写作拟提纲： 提纲是论文写作的设计图，是全文骨架，起到疏通思路，安排材料，形成结构的作用。 ①把初步酝酿形成的思路、观点和想法用文字记录下来，依据提纲行文，随灵感、思路的深入会有新的想法、新的发现，使原来的设想得以修改、补充; ②拟提纲一定要项目齐全，初步构出文章的大体轮廓; ③医学论文序论部分的主要内容是不什么要研究这个题目，解释研究和探讨这一题目的现实意义。 （4）医学论文写作初稿： ①在基本观点已经明确，参考或引用文献资料业已准备妥当时，可按提纲的顺序分段进行; ②初稿一定要定得扎实、圆满，令自己感到十分满意。 (5)医学论文写作初稿修改及定稿： 起草初稿很重要，但修改初稿同样也重要。 ①修改是对初稿的内容不断加深认识，对表达形式不断选择的过程; ②修改的原则是发现什么问题修改什么问题； ③修改时常需要作者把初稿反复阅读几遍，每读一遍就有一次新的感受，就能发现一些不足，然后进行修改加工; ④修改时着重考虑内容、格式、序号、外文字母、表格、插图及参考文献的序号是否符合要求，以及有无错别字。 （以上内容由学术堂整理提供） 
从细胞的类型，作用，功能，深入阐述，最好有自己独特的见解，再联系现实生活谈，也可以写些细胞间的相互协作，怎样共同完成各项生命活动的。选取一些作用独特的细胞写，更吸引人！
医学论文一般有几种类型：综述、个案报道、病例分析、临床研究、科研课题论著、学位论文等等。 医学论文的撰写要看你的经历和年资，这决定了您对问题理解、了解的深度和广度，也就是能力，简要建议如下： 1、在校学生，一般只能写综述等理论探讨型的论文； 2、低年资者，综述、病例个案报道、回顾性病例分析等。 3、高年资者哪一种类型的论文都可以。 至于怎么写医学论文，以下步骤供参考： 结合自己平时的工作和学习，借助数据库查找相关的参考资料，大量参阅相关文献，筛选自己喜欢的、熟悉的内容，找出具有科学性、实用性的论点，着手撰写。以下内容供参考： 医学论文的基本格式及写作方法 （一）标题（title） 标题要求： 阐述具体、用语简洁：一般不超过20个字。 文题相称、确切鲜明：标题体现内容，内容说明标题。 重点突出、主题明确：突出论文主题，高度概括，一目了然。不足以概括论文内容时，可加副标题（破折号、括号或加序码）。 （二）作者署名（author） 作者署名的意义 (1)明确论文责任：文责自负 (2)获得应有的荣誉：载入科技发展的史册 (3)文献检索的需要：著者检索 (4)明确著作权：人身权和财产权 作者署名的原则 署名的个人作者，只限于选定研究课题和制定研究方案，直接参加全部或主要部分研究工作并做出贡献，以及参加撰写论文并对内容负责的人。(GB7713-87《科学技术报告、学位论文和学术论文的编写格式》) 作者署名的要求 (1)分为集体署名和个人署名。 (2)第一作者应是论文课题的创意者、设计者、执行者，是论文的执笔者。 (3)多人合写时，主在前，次在后；多单位合写时，用脚注标明。 (4)作者人数不易过多，一般不超过6人。 (5)指导、协作、审阅者可列入致谢中。 （三）摘要（abstract） 摘要内容和格式 一般格式： (1)目的（objective）：说明论文要解决的问题及其起源、由来。 (2)方法（methods）：说明研究时间、参加完成研究的患者或受试者的人数和研究的主要方法。 (3)结果（results）：说明研究内容中主要结果，包括数据和统计学检验结果。 (4)结论（conclusions）：说明主要结论，包括直接的临床应用。 其它格式 (1)目的（objective， purpose， aim， background）：论文要解决的问题及其起源、由来、研究背景。 (2)设计（design）：论文基本研究设计。 (3)地点（setting）：研究地点、单位、等级。 (4)对象（subjects， patients）：论文研究的时间、参加完成研究的患者或受试者的人数和研究的主要方法。 (5)处理（intervention）：论文的临床治疗和其它处理方法。 (6)检测（measures）：论文为评定结果而进行的主要测试项目。 (7)结果（results）：说明研究内容中主要结果和数据。 (8)结论（conclusions）：说明主要结论，包括直接的临床应用。 摘要的写作要求 (1)连续写出，不分段落，不加小标题，不举例证。 (2)格式规范化。 (3)简短、完整，一般占全文文字的10%左右。 (4)文字性资料，不用图、表、化学结构式。 (5)内容基本一致的英文摘要。 （四）关键词（key words） 关键词是表达科技文献的要素特征，是具有实际意义的词或词组。 主题词是规范化的关键词，关键词是具有灵活性和广泛性的自由语言。现阶段关键词和主题词都作为检索语言使用。由于关键词是自然语言，同义词、近义词、多意词未统一，造成检索误差，故目前多采用从医学主题词表（MeSH）中选择。 关键词格式 3-8个词或词组，之间空一格书写，不加标点符号。外文字符之间可加逗号，除专有名词的字首外，余均小写。 选择关键词的方法 (1)可从标题、摘要和全文内容中选择，以从标题中选择最常用。 (2)要严格筛选，充分、准确、全面地反映文章的中心内容。 (3)查阅医学主题词表确认。 （五）引言（introduction） 引言的基本内容 (1)简要叙述研究此项工作的起因和目的 (2)研究此项工作的历史背景 (3)国内外对研究此项工作的研究现状和研究动态 (4)强调此项工作的重要性、必要性和研究意义 (5)适当说明研究此项工作的时间、材料和方法 引言的写作要求 (1)简明扼要，重点突出：一般为200-500字，约占全文的1/8-1/10。 (2)实事求是、客观评价：不能蓄意贬低前人，切忌妄下断言。 (3)少用套话：水平如何，自有共论。 (4)勿与摘要相同，避免与正文重复：不涉及结果或结论。 (5)一般不写“引言”字样标题。 （六）材料与方法（materials and methods） 材料与方法的主要内容 (1)实验对象： ①动物：名称、品种、数量、来源、年龄、性别、分组标准与方法。 ②微生物或细胞：种、型、株、系、培养条件和实验室条件。 ③临床病例：来源、数量、性别、年龄、病因、病程、病理诊断、分型标准、选择标准。 (2)实验仪器：仪器设备名称、生产厂家、型号、操作方法、改进之点。 (3)实验材料：药品和试剂的名称、成份、规格、纯度、来源、出厂时间、批号、浓度、剂量、给药方法、途径、用药总量。 (4)实验方法与条件： ①临床病例：观察方法、指标、治疗方法、药物名称、剂量、使用方法、疗程。 ②手术与标本：手术名称、术式、麻醉方法、标本制备过程。 ③实验室：实验与记录手段、观察步骤、指标、注意事项、方法改进及依据。 （5）统计学方法： （七）结果（results） 结果是论文价值所在，是研究成果的结晶。全文的结论由此得出，讨论由此引发，判断推理和建议由此导出。 结果的内容 (1)数据：不用原始数据，要经统计学处理。 (2)图表：用于显示规律性和对比性。 (3)照片：能形象客观地表达研究结果。 (4)文字：对数据、图表、照片加以说明。 结果的写作要求 (1)按实验所得到的事实材料进行安排，可分段、分节，可加小标题。 (2)解释客观结果，不要外加作者的评价、分析和推理。 (3)结果要真实性，不可将不符合主观设想的数据或其它结果随意删除。 (4)因图表和照片所占篇幅较大，能用文字说明的问题，尽可能少用或不用图表或照片。 （八）讨论（discussion） 讨论是论文的重要主体部分，是作者对所进行的研究中所得到的资料进行归纳、概括和探讨，提出自己的见解，评价其意义。 讨论的内容 (1)对实验观察过程中各种数据或现象的理论分析和解释。 (2)评估自己结果的正确性和可靠性，与他人结果比较异同，并解释其原因。 (3)实验结果的理论意义及对实践的指导作用和应用价值。 (4)作用机制或变化规律的探讨。 (5)同类课题国内外研究动态及与本文的关系。 《如何写作和发表医学论文》写作和发表归纳为二十步，可供大家参考。 信息来源：创 新 医 学 网 （1)所写论文能否用一简单句子说明信息，其实亦即初步的主题。 (2)是否值得写？以前有无类似的报道，这样一方面可避免重复，另一方面又可从以往作者的报道中有所借鉴，如表格的设计等。 (3)论文的重要性。作者在论文中能否提出某些新论点或实践经验，供争论或参考。 (4)根据所投杂志，写作时宜限定读者对象。 (5)仔细浏览拟投稿杂志内容，了解该杂志性质，是否国外发行。 (6)检索文献，通常从近5年开始，如资料不足，可再往前找5年，直到满意为止。 (7)考虑参与本论文写作的作者名单。 (8)分头收集、整理原始资料。 9)仔细阅读稿约，这是动手写作前的重要步骤，务必符合其规则，所谓投其所好。 (10)论文基本结构，是属论著、病历报告抑或综述。 (11)列出原始草稿提纲。 (12)写出草稿原文。 (13)推敲、修改稿件至满意为止。 (14)用准确、简练和流畅的文体书写。 (15)应符合科学性要求。 (16)选用适当的图表。 (17)重修底稿以达到刊出要求。 (18)复印留底，论文附介绍信寄编辑部。 (19)答复编辑部来函的有关问题，修正后迅速寄出。 (20)对将刊出的稿样细心、认真、逐字校对后（所谓校红）寄回编辑部，静候佳音。
激光扫描共聚焦显微镜系统及其在细胞生物学中的应用》 摘要激光扫描共聚焦显微镜是近十年发展起来的医学图象分析仪器，现已广泛应用于荧光定量测量、共焦图象分析、三维图象重建、活细胞动力学参数监测和胞间通讯研究等方面。其性能为普遍光学显微镜质的飞跃，是电子显微镜的一个补充。本文以美国Meridian公司的ACASULTIMA312为例简要介绍了激光扫描共聚显微镜系统的结构，功能和生物学应用前景。 关键词; 激光；共聚焦显微镜；粘附细胞分析与筛选（ACAS） TheLaserScanningConfocalMicroscopySystemanditsBiologicalApplications ChenYaowen，LinJielong，LaiXiaoying，MeiPinchao (ShantouUMCollege，CentralLab，ShantouGuangdong515031) AhstractTheLaserScanningConfocalMicroscopyisanewmedicalimageanalysisinstrument，Nowitiswidelyappliedinsuchfieldsasfluorescentquantitativemeasurement，conpocalimageandlyusis，3-Dreconstruction，Kineticsignalmonitioringoflivingcell，cellcellcommunicationresearches，Inthispaper，ACSAULTIMA312(MeridianCo，USA)istakenasanexampletointroducetheprincipleofconfocalmicroscopy， KeywordsLaserConfocalMicroscopyAdherentCellAnalysisandsorting(ACSA) 激光扫描共聚焦显微镜（LaserscanningConfocalMicroscopy，简称LSCM）是近代生物医学图象仪器的最重要发展之一，它是在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置，使用紫外光或可见光激发荧光探针，利用计算机进行图象处理，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图象，以及在亚细胞水平上观察诸如Ca2+、pH值、膜电位等生理信号及细胞形态的变化。已广泛应用于细胞生物学、生理学、病理学、解剖学、胚胎学、免疫学和神经生物学等领域[1、2、3]，对生物样品进行定性、定量、定时和定位研究具有很大的优越性，为这些领域新一代强有力的研究工具。 创建于1983年的美国Meridian公司，在90年代推出的“激光扫描共聚焦显微镜”这一项具有划时代的义意的高科技产品，曾获得美国“政府新产品奖”和两次“高科技领先技术奖”，它能达到每秒120幅画面的高速扫描激光共聚焦观察，可提供实时，真彩色的激光共聚焦原色图象。我院最近引起的ACASuLTIMA312是Meridian公司最新的高科技产品，为同类仪器中档次最高、功能最全的精密仪器。现以该仪器为例介绍激光扫描共聚焦显微镜系统及其在细胞生物学中的应用。 1、激光扫描共聚焦显微镜成像原理及组成 有关共聚焦显微镜的某些技术原理，早在1957年就已提出，二十年后由Brandengoff在高数值孔径透镜装置上改装成功具有高清晰度的共聚焦显微镜[5]，1985年WijnaendtsVanResandt发表了第一篇有关激光扫描共聚焦显微镜在生物学中应用的文章，到了1987年，才发展成现在通常意义上的第一代激光扫描共聚焦显微镜。 激光扫描共聚焦显微镜成像原理如图1所示，激光器发出的激光束经过扩束透镜和光束整形镜，变成一束直径较大的平行光束，长通分色反射镜使光束偏转90度，经过物镜会聚在物镜的焦点上，样品中的荧光物质在激光的激发下发射沿各个方向的荧光，一部分荧光经过物镜、长通分色反射镜、聚焦透镜、会聚在聚焦物镜的焦点处，再通过焦点处的针孔，由检测器接收。 从图1中可以看出，只有在物镜的焦平面上发出的荧光才够到达检测器，其它位置发出的光均不能过针孔。由于物镜和会聚透镜的焦点在同一光轴上，因而称这种方式成像的显微镜为共聚焦显微镜为共聚显微镜。在成像过程中针孔起着关键作用，针孔直径的大小不仅决定是以共聚焦扫描方式成像还是以普遍学显微镜扫描方式成像，而且对图像的对比度和分辨率有重要的影响。 ACASULTIMa312采用快速镜扫描或台阶扫描对样品逐点扫描成像，由于样品中不同的扫描点始终在物镜和会聚透镜的光轴上，因而它以相同的信噪比扫描整个样品，扫描精度达1μm，扫描面积最大的为10cm×8cm，当激光逐点扫描样品时，针孔后的光电倍增管也逐点获得对应光点的共聚焦图像，并将之转化为数字信号传输至计算机，最终在屏幕上聚合成清晰的整个焦平面的共聚聚焦图像。一个微动步进马达控制栽物台的升降，使焦平面依次位于标本的不同层面上，可以逐层获得标本相应的光学横断面的图像。这称为“光学切片”。再利用计算机的图像处理及三维重建软件。可以得到高清晰度来表现标本的外形剖面，十分灵活、直观地进行形态学观察。 2、激光扫描共聚焦显微镜硬件和软件系统 1ACASULTIMa312硬件及参数指标 激光光源：氩离子激光（50mW的紫外光、999mW的可见光），能同时/顺序/分别输出紫外光和可见光，激发波长为351-364nm；488nm；514nm。 计算机系统：80586/133MHzPCI/80MBRAM/2000MBSCSI硬盘/150MBBernoulli盘驱动器/17’’大屏幕显示器。 共聚焦系统：计算机自动控制光路准调节；计算机控制孔径校准；计算机调节孔径大小；自动Z轴调节（最小1μm）。 光学探测系统：3个测窗式PMT采集荧光；1个CCD系统；12位的高速A/D转换器。 图像分辨率：图像大小1535×1535；像素最小距离：1μm；灰度为4096级。 扫描方式：快速镜扫描DualScan台阶扫描；扫描精度1μm；扫描面积最大为10cm×8cm；扫描平面：XY和XZ和独特点、线、面扫描。2激光扫描共聚焦显微镜软件系统 ACASULTIMa312系统采用独特设计的软件将激光细胞仪与先进的计算机技术结合，产生快速、高效、灵活的操作系统，完备的数据采集、分析与管理功能。基于生物医学研究有如下的软件。 ImageAnalyze—对于单色、比色和三色标记的二维荧光图像的定量分析，可产生透射光图像重叠，同时AutoImage可多个区域的自动扫描和荧光定量，以及相同区域的时间顺序扫描。 RatioAnalysis和Kinetics—测定细胞内的离子变化，可有点扫描、线扫描及图像扫描三种测定形式，以监测各种速率的生物反应。 Cell–CellCommunicationandFRAP-相邻细胞的FRAP分析。该软件首先用可光淬灭特异的细胞荧光，然后在多个时间点扫描，此扫描可对单一区域或细胞的多个选择区域，可产生透射光图像并与其它图像重叠。 CellList—储存被选择细胞的位置，即可自动对较大样品进行扫描，又可产生较小样品特异部位的网络位置表，以进行自动的测量、筛选和重复测定。 CellSorting—ACAS具备如下四种分选方式： AblationSort:预选定义一个荧光阈值，然后对特定细胞杀伤。②CookieCutterSort在用户定义的中心点四周切割Cookies。③QuickSort：对已定义的细胞表列，用Ablation或CookieCutter作分选。④ManualSort：直接使用鼠标控制载物台位置及激光脉冲，并杀灭和分选细胞，进行细胞显微外科，染色体切割和光隐阱等操作。 ConfocalImaging—共聚焦分析，可实现Z轴定量，三维立体图像分析（包括SFP模拟荧光处理法，DP深度投影法和SP文体投影法），以及视点移动动画。 3激光扫描共聚焦显微镜在细胞生物学中的应用 1定量荧光测量 ACAS可进行重复性极佳的低光探测及活细胞荧光定量分析。利用这一功能既可对单个细胞或细胞群的溶酶体，线粒体、DNA、RNA和受体分子含量、成份及分布进行定性及定量测定，还可测定诸如膜电位和配体结合等生化反应程度。此外，还适用于高灵敏度快速的免疫荧光测定，这种定量可以准确监测抗原表达，细胞结合和杀伤及定量的形态学特性，以揭示诸如肿瘤相关抗原表达的准确定位及定量信息。 2定量共聚焦图像分析 借助于ACAS激光共焦系统，可以获得生物样品高反差、高分辨率、高灵敏度的二维图像。可得到完整活的或固定的细胞及组织的系列及光切片，从而得到各层面的信息，三维重建后可以揭示亚细胞结构的空间关系。能测定细胞光学切片的物理、生物化学特性的变化，如DNA含量、RNA含量、分子扩散、胞内离子等，亦可以对这些动态变化进行准确的定性、定量、定时及定位分析。 3三维重组分析生物结构 ACAS使用SFP进行三维图像重组，SFP将各光学切片的数据组合成一个真实的三维图像，并可从任意角度观察，也可以借助改变照明角度来突出其特征，产生更生动逼真的三维效果。 4动态荧光测定 Ca2+、pH及其它细胞内离子测定，利用ACAS能迅速对样品的点，线或二维图像扫描，测量单次、多次单色、双发射和三发射光比率，使用诸如Indo-1、BCECF、Fluo-3等多种荧光探针对各种离子作定量分析。可以直接得到大分子的扩散速率，能定量测定细胞溶液中Ca2+对肿瘤启动因子、生长因子及各种激素等刺激的反应，以及使用双荧光探针Fluo-3和CNARF进行Ca2+和pH的同时测定。 5荧光光漂白恢复（FRAP）--活细胞的动力学参数 荧光光漂白恢复技术借助高强度脉冲式激光照射细胞某一区域，从而造成该区域荧光分子的光淬灭，该区域周围的非淬灭荧光分子将以一定速率向受照区域扩散，可通过低强度激光扫描探测此扩散速率。通过ACAS可直接测量分子扩散率、恢复速度，并由此而揭示细胞结构及相关的机制。 6胞间通讯研究 动物细胞中由缝隙连接介导的胞间通讯被认为在细胞增殖和分化中起非常重要的作用。ACAS可用于测定相邻植物和动物细胞之间细胞间通讯，测量由细胞缝隙连接介导的分子转移，研究肿瘤启动因子和生长因子对缝隙连接介导的胞间通讯的抑制作用，以及胞内Ca2+，PH和cAMP水平对缝隙连接的调节作用。 7细胞膜流动性测定 ACAS设计了专用的软件用于对细胞膜流动性进行定量和定性分析。荧光膜探针受到极化光线激发后，其发射光极性依赖于荧光分子的旋转，而这种有序的运动自由度依赖于荧光分子周围的膜流动性，因此极性测量间接反映细胞膜流动性。这种膜流动性测定在膜的磷脂酸组成分析、药物效应和作用位点，温度反应测定和物种比较等方面有重要作用。 8笼锁—解笼锁测定 许多重要的生活物质都有其笼锁化合物，在处于笼锁状态时，其功能被封闭，而一旦被特异波长的瞬间光照射后，光活化解笼锁，使其恢复原有活性和功能，在细胞的增值、分化等生物代谢过程中发挥功能。利用ACAS可以人为控制这种瞬间光的照射波长和时间，从而达到人为控制多种生物活性产物和其它化合物在生物代谢中发挥功能的时间和空间作用。 9粘附细胞分选 ACAS是目前唯一能对粘附细胞进行分离筛选的分析细胞学仪器，它对培养皿底的粘附细胞有两种分选方法：（1）Coolie-CutterTM法，它是Meidian公司专利技术，首先将细胞贴壁培养在特制培养皿上，然后用高能量激光的欲选细胞四周切割成八角形几何形状，而非选择细胞则因在八角形之外而被去除，该分选方式特别适用于选择数量较少诸如突变细胞、转移细胞和杂交瘤细胞，即使百万分之一机率的也非常理想。（2）激光消除法，该方法亦基于细胞形态及荧光特性，用高能量激光自动杀灭不需要的细胞，留下完整活细胞亚群继续培养，此方法特别适于对数量较多细胞的选择。 10细胞激光显微外科及光陷阱技术 借助ACAS可将激光当作“光子刀”使用，借此来完成诸如细胞膜瞬间穿孔、切除线粒体、溶酶体等细胞器、染色体切割、神经元突起切除等一系列细胞外科手术。通过ACAS光陷阱操作来移动细胞的微小颗粒和结构，该新技术广泛用于染色体、细胞器及细胞骨架的移动。 4、结语 激光扫描共聚焦显微镜是近十年发展起来的医学图像分析仪器，与传统的光学显微镜相比，大大地提高了分辨率，能得到真正具有三维清晰度的原色图象。并可探测某些低对比度或弱荧光样品，通过目镜直接观察各种生物样品的弱自发荧光。能动态测量Ca2+、pH值，Na1+、Mg2+等影响细胞代谢的各种生理指标[9]，对细胞动力学研究有着重要的意义。同时激光扫描共聚显微镜可以处理活的标本，不会对标本造成物理化学特性的破坏，更接近细胞生活状态参数测定。可见激光扫描共聚焦显微镜是普遍显微镜上的质的飞跃，是电子显微镜的一个补充，现已广泛用于荧光定量测量，共焦图像分析，三维图像重建、活细胞动力学参数分析和胞间通讯研究等方面，在整个细胞生物学研究领域有着广阔的应用前景。
